Descripción morfológica y caracterización molecular de los hongos asociados a la raíz de Masdevallia coccinea Linden ex Lindl / Morphological description and molecular characterization of fungi associated with the root of Masdevallia coccinea Linden ex Lindl

RESUMEN Masdevallia coccinea es una orquídea llamativa, endémica de Colombia, empleada en la generación de híbridos ornamentales con más de una década, clasificada como una especie en peligro de extinción. Entre las técnicas usadas para la propagación in vitro y ex situ de especies de la familia Orchidaceae, se estudia la simbiosis micorrízica, debido a que esta familia micoheterótrofa depende de una correlación con estos hongos para subsistir en las primeras etapas de desarrollo en estado silvestre. Con el objetivo de caracterizar e identificar los hongos asociados a las raíces de M. coccinea, se realizó un estudio histológico en raíces y, a partir de micropreparados, se caracterizó morfológicamente micro, macroscópica y molecularmente diez aislamientos. Se identificó a M. coccinea como una orquídea que presenta diferentes patrones de colonización micorrízicos y con posibles efectos endófitos de los géneros Aspergillus, Scopulariopsis, Trichoderma, Ilyonectria y del orden Xylariales en condiciones ex situ.

ABSTRACT Masdevallia coccinea is a striking orchid, endemic to Colombia, used in the generation of ornamental hybrids, with more than a decade classified as an endangered species. Among the techniques used for in vitro and ex situ propagation of species of the Orchidaceae family, mycorrhizal symbiosis is studied, because this mycoheterotrophic family depends on a correlation with these fungi to survive in the early stages of development in the wild. In order to characterize and identify the fungi associated with the roots of M. coccinea, a histological study was carried out on roots and 10 isolates were morphologically, macroscopically and molecularly characterized from micropreparations. M. coccinea is identified as an orchid with different mycorrhizal colonization patterns and with possible endophytic effects of the genera Aspergillus, Scopulariopsis, Trichoderma, Ilyonectria and the order Xylariales under ex situ conditions.

Somatic embryos from Phalaenopsis classic Spotted Pink (Orchidaceae) protocorms / Embriões somáticos provenientes de protocormos de Phalaenopsis classic Spotted Pink (Orquidaceae)

ABSTRACT: The aim of the present study was to induce the formation of somatic embryos in protocorms from Phalaenopsis Classic Spotted Pink hybrids at two physiological maturation stages, namely: 80 and 120 days after seed inoculation (DASI). Protocorms were inoculated in ½ MS medium supplemented with 0.1 mg L-1 ANA and 3 mg L-1 TDZ. Protocorms were inoculated 120 days after sowing were more developed at the 15th cultivation day due to the formation of pro-embryogenic structures. It was possible seeing the formation of globular- and torpedo-stage somatic embryos at the 30th day of cultivation in somatic embryogenesis (SE) induction medium. The protocorms inoculated at the 80th DASI did not formed somatic embryos; they oxidized 20 days after cultivation in SE-induction medium. The formation of somatic embryos happened directly on the explant, thus characterizing a direct somatic embryogenesis. The embryos converted into plants when the somatic embryos were transferred to the nutrient medium containing no growth regulator. Therefore, it was concluded that the somatic embryos induction from protocorms 120 days after sowing was positive, since the embryos were able to become plants and presented vegetative organs with morphological traits similar to those of the matrix plant.

RESUMO: O presente estudo buscou induzir a formação de embriões somáticos em protocormos do híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink em dois estádios de maturação fisiológica aos 80 e 120 dias após a inoculação das sementes (DAIS). Os protocormos foram inoculados em meio ½ MS suplementado com 0,1 mg L-1 de ANA e 3 mg L-1 de TDZ. Aos 15 dias de cultivo os protocormos, inoculados aos 120 dias após a semeadura, apresentavam estádio mais desenvolvido, apresentando formação de estruturas pró-embriogênicas. Aos 30 dias de cultivo em meio de indução de ES observou-se a formação de embriões somáticos na fase globular e torpedo. Os protocormos inoculados com 80 DAIS não evoluíram para a formação de embriões somáticos, ocorrendo a oxidação destes aos 20 dias após o cultivo em meio de indução de ES. A formação dos embriões somáticos ocorreu diretamente no explante, caracterizando uma embriogênese somática direta. Quando os embriões somáticos foram transferidos para o meio nutritivo sem regulador de crescimento, houve a conversão em plantas. Diante disso, conclui-se que a indução de embriões somáticos a partir de protocormos com 120 dias após a semeadura, foi positiva, em que os embriões obtidos apresentaram competência em converter-se em plantas, apresentando os órgãos vegetativos com características morfológicas satisfatórias.

Carbohydrates on the growth of Cattleya schilleriana Reichb.f. seedlings (Orchidaceae) / Carboidratos no crescimento de plântulas de Cattleya schilleriana Reichb.f. (Orchidaceae)

ABSTRACT: The aim of the present study was to evaluate the effects of carbohydrate supplementation on the propagation of the orchid Cattleya schilleriana. The 120-d-old seedlings were subcultured in fructose-, glucose-, or sucrose-supplemented (0, 15, 30, and 45g L-1) ½ MS culture medium (half-strength macronutrient concentrations), using a completely random design with four repetitions per treatment. After 120d of treatment, root number and length, leaf number and length, and fresh weight were evaluated, and seedling survival was evaluated after 75d of acclimatization in a greenhouse. The in vitro growth data were submitted to regression analysis, whereas the percentage survival data were analyzed using ANOVA and Tukey's test. Both in vitro growth and ex vitro survival were lowest when the plantlets were grown in the absence of a carbohydrate source and highest (>90% survival) when supplemented with glucose. According to our findings, the addition of either glucose (30g L-1) or sucrose (30g L-1) is recommended for mass propagation of C. schilleriana.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de doses de carboidratos em meio de cultura ½ MS para a propagação da orquídea Cattleya schilleriana. Plântulas com 120 dias após semeadura foram recultivadas em 12 tratamentos, onde foram investigadas a adição de diferentes doses de frutose, glicose e sacarose (0, 15, 30 e 45g L-1). O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado com quatro repetições por tratamento. Após 120 dias nos tratamentos, foram mensurados o número de raízes, comprimento da maior raiz, número de folhas, comprimento da maior folha e massa fresca total. Depois as plântulas foram aclimatizadas em casa de vegetação e avaliada a taxa de sobrevivência após 75 dias. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Tukey a 5% de probabilidade e ajustadas curvas de regressão. A ausência de carboidrato reduziu o crescimento das plântulas entre todas as características avaliadas in vitro e ex vitro. As doses de glicose promoveram maior eficiência para o crescimento in vitro e sobrevivência acima de 90% após a aclimatização. Assim, a adição de glicose (30g L-1) ou sacarose (30g L-1) são recomendadas para a propagação massal de C. schilleriana.

Effects of naphthalene acetic acid (NAA) on the plant growth and sugars effects on the cut flowers Mokara chark kuan orchid / Efeitos do ácido naftaleno acético (naa) sobre o crescimento das plantas e de açúcares sobre flores cortadas da orquídea Mokara chark kuan

A study was carried out to investigate the effects of Naphthalene Acetic Acid (NAA) and sugars on the plants and flowers quality of Mokara Chark Kuan orchid respectively. Parameters were monitored between November 2014 to March 2015, with the application of three concentrations of NAA at 25, 50 and 100 mg/L in the field. The application of 25 mg/L NAA significantly increases the plant height, number of roots and total soluble solid content of Mokara Chark Kuan orchid plants. But, there was no significant effect on the leaves number, chlorophyll content and number of flowers. In case of storage experiment, the cut Mokara Chark Kuan flowers were treated with 3 % and 6 % glucose and sucrose. Physiological parameters: fresh weight, water uptake, petal thickness, discoloration and vase life were evaluated. It can be concluded that spraying with 25 mg/L NAA enhanced the plant growth and development of Mokara Chark Kuan orchid. The study also showed that 6 % sucrose was the best treatment for maintaining the post-harvest quality as well as vase life of cut Mokara Chark Kuan orchid flowers.

Um estudo foi realizado para investigar os efeitos do ácido naftaleno ácido acético (NAA) no crescimento de e açúcares no plantas e na qualidade de flores da orquídea Mokara Chark Kuan . Os parâmetros foram monitorados entre novembro de 2014 e março 2015, com a aplicação de três concentrações de ANA em 25, 50 e 100 mg / L sob condições de campo. A aplicação de 25 mg / L de ANA aumentou significativamente a altura da planta, o número de raízes e o teor de sólidos solúveis totais de plantas de orquídeas Mokara Chark Kuan. Todavia, não houve nenhum efeito significativo sobre o número de folhas, o teor de clorofila e o número de flores. No caso do experimento de armazenamento, flores cortadas de Mokara Chark Kuan foram tratadas com 3% e 6% de glicose e de sacarose. Os parâmetros fisiológicos: peso fresco, absorção de água, espessura pétala, descoloração e vida de vaso foram avaliados. Pode concluir-se que a pulverização com 25 mg / L de NAA aumentou o crescimento e o desenvolvimento das plantas de orquídea Mokara Chark Kuan. O estudo também mostrou que 6% de sacarose foi o melhor tratamento para a manutenção da qualidade pós-colheita, bem como vida de vaso em flores de corte da orquídea Mokara Chark Kuan .

INDUÇÃO E HISTOLOGIA DE EMBRIÕES SOMÁTICOS PRIMÁRIOS E SECUNDÁRIOS DO HÍBRIDO Phalaenopsis CLASSIC SPOTTED PINK (ORQUIDACEAE) / Induction and Histology of Primary and Secondary Somatic Embryos of Phalaenopsis Hybrid Classic Spotted Pink (Orquidaceae) / Inducción e histología de embriones somáticos primarios y secundarios del híbrido Classic Spotted Pink (Orquidaceae)

O presente trabalho teve como objetivos induzir a formação de embriões somáticos in vitro no híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink, utilizando diferentes meios nutritivos e avaliar a morfologia interna desses embriões por meio de análises histológicas e histoquímicas. Folhas jovens de plantas cultivadas in vitro foram utilizadas como explantes para indução de embriões somáticos em diferentes meios nutritivos: New Dogashima Medium, contendo ANA (0,537μM) e BAP (4,440μM), acrescido de phytagel e com pH 5,8 (NDM) e o Murashige & Skoog com a metade da concentração dos sais, acrescido de ANA (0,537μM) e TDZ (13,621μM), gelificado com gelrite e o pH 5,2 (½ MS). Embriões somáticos primários foram obtidos aos 90 dias de cultivo no meio ½MS e foram transferidos para o mesmo meio para obtenção de embriões secundários. Os embriões somáticos primários e secundários foram subcultivados para meio MS com metade da concentração de sais, sem fitoregulador submetidos a fotoperíodo de 16 horas, o qual estimulou a produção de clorofila tanto nos embriões primários como secundários, promovendo o desenvolvimento desses em protocormos e posteriormente em plantas. As análises histológicas demonstraram que os embriões somáticos foram formados diretamente das camadas epidérmicas dos explantes, sem passar pela fase de calo, caracterizando embriogênese somática direta. Os métodos histoquímicos utilizados possibilitaram evidenciar a deposição de amido e lipídeos nas células embriogênicas em decorrência de mecanismos fisiológicos, permitindo o desenvolvimento dos embriões primários e secundários em plantas. Portanto, o meio ½ MS acrescido de ANA (0,537μM) e TDZ (13,621μM), gelificado com gelrite e o pH 5,2 promoveu a obtenção de embriões primários e secundários com capacidade para regenerar plantas apresentando características morfológicas semelhantes a planta matriz.

The present work had as objectives to induce the formation of somatic embryos in vitro on Phalaenopsis hybrid Classic Spotted Pink, using different nutrient medium and assess the internal morphology of these embryos by means of histological and histochemical analysis. Young leaves of plants grown in vitro were used as explants for induction of somatic embryos in different nutrient medium: New Dogashima Medium, containing ANA (0.537 μM) and BAP (4.440 μM) plus phytagel and with pH 5.8 (NDM) and the Murashige & Skoog with half the concentration of salts, plus NNA (0.537 μM) and TDZ (13.621 μM), jellied with gelrite and pH 5.2 (0.5 MS). Primary somatic embryos were obtained to 90 days of cultivation in half MS and have been transferred to the same means for obtaining of secondary embryos. The primary and secondary somatic embryos were subcultived for MS with half the concentration of salts, without fitoregulator subjected to photoperiod of 16 hours, which stimulated the production of chlorophyll in primary embryos as secondary, promoting the development of those in protocorms and later in plants. The histological analysis showed that the somatic embryos were formed directly from the epidermal layers of the explants, without going through the phase of callus, featuring direct somatic embryogenesis. The histochemical methods used made it possible to highlight the deposition of starch and lipids in cells embriogenics as a result of physiological mechanisms, enabling the development of primary and secondary embryos in plants. Therefore, the medium 0.5 MS Plus ANA (0.537 μM) and TDZ (13.621 μM), jellied with gelrite and pH 5.2 promoted to obtain primary and secondary embryos with ability to regenerate plants showing morphological similar the mother plant.

El presente trabajo tuvo como objetivos inducir la formación de embriones somáticos in vitro en el híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink, utilizando diferentes medios nutritivos, y evaluar la morfología interna de estos embriones mediante análisis histológico e histoquímico. Hojas jóvenes de plantas cultivadas in vitro se utilizaron como explantes para la inducción de embriones somáticos en diferentes medios nutritivos: New Dogashima Medium, contenido de ANA (0.537 mM) y BAP (4.440 μM) además de phytagel y con pH 5.8 (NDM) y el Murashige Skoog con la mitad de la concentración de sales, además de ANA (0.537 μM) y TDZ (13.621 μM), gelificado gelrite y pH 5.2 (½ MS). Se obtuvieron embriones somáticos primarios a los 90 días de cultivo en el medio ½ MS y a estos se les transfirió al mismo medio (½ MS) para la obtención de embriones secundarios. Los embriones somáticos primarios y secundarios fueron subcultivados para MS con la mitad de la concentración de sales, sin reguladores de crecimiento y sometidos a fotoperiodo de 16 horas, lo que estimuló la producción de clorofila tanto en los embriones primarios como en los secundarios, promoviendo el desarrollo de los protocormos y más tarde en las plantas. Los análisis histológicos demostraron que los embriones somáticos fueron formados directamente en las capas epidérmicas de los explantes, sin pasar por la fase de callo, vía embriogénesis somática directa. Los métodos histoquímicos hicieron posible destacar la deposición de almidón y lípidos en las células embriogénicas como resultado de mecanismos fisiológicos, que permiten el desarrollo de los embriones primarios y secundarios en las plantas. Por lo tanto, el medio ½ MS contenido de ANA (0.537 μM) y TDZ (13.621 μM), con gelrite y pH 5.2 permitió obtener embriones primarios y secundarios con capacidad para regenerar plantas con caracteres morfológicos similares a los dela planta matriz.

DISTRIBUCIÓN Y PREFERENCIAS CLIMÁTICAS DE Sobralia uribei (ORCHIDACEAE): UNA ESPECIE ENDÉMICA DE SANTANDER, COLOMBIA / DISTRIBUTION AND CLIMATE PREFERENCES Sobralia uribei (ORCHIDACEAE): AN ENDEMIC SPECIES FROM SANTANDER, COLOMBIA

En Colombia alrededor del 35% de las especies registradas son endémicas y, en algunos casos, sólo son conocidas por el espécimen o localidad tipo. No obstante, el avance de la frontera agrícola, la deforestación, la minería y otras prácticas antropogénicas, son las principales causas de su extinción. Los estudios realizados en Santander, desde la decada del sesenta, determinaron que Sobralia uribei, especie endémica de este departamento, es conocida en una localidad del municipio de Piedecuesta. El objetivo de esta investigación fue conocer la diversidad intraespecífica, distribución y estado actual de conservación de S. uribei. Por esta razón, se revisaron los herbarios locales y se realizaron salidas de campo en el departamento de Santander. Los datos obtenidos fueron procesados para análisis morfológicos y biogeográficos mediante el programa DIVA-GIS. Después de 54 años, se registra una nueva localidad en el municipio de Contratación, a una distancia en línea recta de 84 km, y un promedio de 1500-2000 msnm. Los caracteres morfológicos diferenciales fueron la altura de la planta (1-3 m), el color del ápice del labelo (blanco o lila), y el número de flores por racimo (9-11vs 7-9). La distribución potencial se concentró en los municipios de El Carmen, San Vicente de Chucurí, Hato, Galán y Zapatoca, entre los 1500 a 2600 msnm, y no donde fue colectada. La temperatura de las subpoblaciones no presenta diferencias significativas, y los inicios de la precipitación de enero a abril permiten la floración de la especie. El estatus de conservación de S. uribei se defiene en la categoría de Peligro Crítico (CR) según los criterios de riesgo propuestos por la UICN. Actualmente, la intervención antrópica es el factor principal que puede causar la extinción de las subpoblaciones existentes, por lo que estrategias de conservación in situ y ex situ son urgentes y necesarias.

In Colombia, about 35% of the recorded species are endemic and in some cases are only known specimen type or location. However, the advance of the agricultural frontier, deforestation, mining and other anthropogenic practices are the main causes of extinction. Studies in Santander, from the sixties, determined that Sobralia uribei, endemic to this department, is known in a locality in the municipality of Piedecuesta. The objective of this research was to study the intraspecific diversity, distribution and state of conservation of S. uribei. For this reason, local herbal reviewed and conducted field trips in the Department of Santander. The data obtained were processed for morphological and biogeographic analysis using DIVA-GIS program. After 54 years, a new location is recorded in the municipality of Trade, a straight line distance of 84 km, and an average of 1500 to 2000 m. The differential morphological characters were plant height (1-3 m), the apex of the lip color (white or purple), and the number of flowers per cluster (9-11 vs 7-9). The potential distribution is concentrated in the towns of El Carmen, San Vicente de Chucurí, Hato, Galán and Zapatoca, between 1500-2600 m, and not where it was collected. The temperature of subpopulations no significant differences and the beginning of the precipitation from January to April, allowing the flowering of the species. The conservation status of S. uribei is defiene in the category of Critically Endangered (CR) according to risk criteria proposed by IUCN. Currently, human intervention is the main factor that may cause the extinction of existing subpopulations, so conservation strategies in situ and ex situ, are urgent and necessary.

In vitro development of Encyclea cordigera in different concentrations of honey / Desenvolvimento in vitro de Encyclea cordigera em diferentes concentrações de mel

ABSTRACT: The objective of this paper was to evaluate the effects of different honey concentrations in culture media, in comparison to sucrose medium, for the in vitro development of the epiphytic Encyclea cordigera orchid, in order to improve the process of propagation of the species. The in vitro germination was prepared on a reduced Murashige & Skoog (MS) medium. After 90 days, the seedlings were divided into different treatments, where they remained for another 90 days. Six treatments were set up (30g L-1 of sucrose; 15, 30, 45, and 60g L-1 of honey; and absence of any carbohydrates) in a completely randomized design. Plants were removed from the vials 270 days after the start of the experiment, and the number of roots, length of the largest leaf, length of the longest root, number of leaves, and fresh and dry masses were evaluated. Data concerning the number of leaves and roots were (x+1)1/2 transformed and subjected to an analysis of variance (ANOVA); the means were compared by a Tukey's test set at 5% probability. Medium containing 60g L-1 of honey proved to be superior to the sucrose medium traditionally used, favoring the in vitro growth and development of Encyclea cordigera. This medium can therefore be recommended for the propagation of this species, which is usually cultivated as an ornamental plant.

RESUMO: Este trabalho foi realizado com objetivo de avaliar a influência da concentração de mel no meio de cultura, comparando-o com a sacarose, para o desenvolvimento in vitro da orquídea epífita Encyclea cordigera, a fim de aperfeiçoar o processo de propagação dessa espécie. A semeadura in vitro procedeu-se em meio de cultura Murashige & Skoog (MS) reduzido e, após 90 dias, as plântulas foram distribuídas entre os tratamentos, em que permaneceram por mais 90 dias. Seis tratamentos (30g L-1 de sacarose, 15, 30, 45 e 60g L-1 de mel e ausência de carboidrato) foram utilizados, em delineamento inteiramente casualizado. Após 270 dias do início do experimento, as plantas foram retiradas dos frascos, sendo avaliado o número de raízes, comprimento da maior folha, comprimento da maior raiz, número de folhas, massa fresca e massa seca. Os dados de número de folhas e de raízes foram transformados (x+1)1/2 e submetidos à análise de variância (ANAVA); as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O meio de cultura suplementado com 60g L-1 de mel favoreceu o crescimento e desenvolvimento in vitro de Encyclea cordigera, sendo superior ao uso de sacarose, que é tradicionalmente usado, podendo ser recomendado para propagação dessa orquídea, que apresenta potencial ornamental.

Micropropagation of Brasilidium forbesii (Orchidaceae) through transverse and longitudinal thin cell layer culture / Micropropagação de Brasilidium forbesii (Orchidaceae) pela técnica 'thin cell layer' longitudinal e transversal

An efficient in vitro propagation method was established for Brasilidium forbesii (Hook.) Campacci using transverse and longitudinal thin cell layer (tTCL and lTCL, respectively) culture systems. Six-month-old protocorms from in vitro germinated seeds were used for this study. TCLs (1.0-mm thick) from protocorms were grown on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with benzyladenine (BA) (0.5­4.0 µM).The lTCL technique was more efficient for inducing protocorm-like bodies (PLBs) and regenerating shoots than the tTCL technique. The frequency of PLB formation was influenced by BA concentration, and the lTCL explant grown on a medium containing 2.0 µM BA produced the highest percentage of new protocorms (77%) with a total of 22.7 PLBs per explant, after the first subculture on the same medium. Plantlet development was optimal on WPM medium containing 3.0 g L -1 activated charcoal, and indole-3 -butyric acid was not necessary for rooting. Regenerated plants were successfully acclimatized in a greenhouse after 16 weeks using vermiculite as the substrate (100% survival).

Foi estabelecido um método eficiente de propagação in vitro para Brasilidium forbesii (Hook.) Campacci utilizando a técnica 'thin cell layer' transversal (TCLt) e longitudinal (TCLl). Foram utilizados protocormos de seis meses obtidos da germinação in vitro. TCLs (1,0 mm de espessura) dos protocormos foram cultivados no meio 'Woody Plant Medium' (WPM), acrescido com benziladenina (BA) (0,5 a 4,0 µM). A técnica TCLl foi mais eficiente para indução de estruturas semelhantes a protocormos (ESPs) e regeneração de brotações do que a técnica TCLt. A frequência de formação de ESP foi influenciada pela concentração de BA e o explante TCLl, cultivado em um meio contendo 2,0 µM BA, produziu a mais alta percentagem de novos protocormos (77%), com um total de 22,7 PLBs por explante, após o primeiro subcultivo para o mesmo meio. O desenvolvimento das plântulas foi eficiente no meio WPM contendo 3,0 g L -1 de carvão ativado e o ácido indol-3- butírico (AIB) não foi necessário para o enraizamento. Plantas regeneradas foram estabelecidas com sucesso em casa de vegetação, utilizando vermiculita como substrato (100% de sobrevivência), após 16 semanas.

Desenvolvimento inicial e crescimento in vitro de Cattleya violacea (Kunth) Rolfe em diferentes concentrações de sacarose / Initial development and in vitro growth of Cattleya violacea (Kunth) Rolfe in different sucrose concentrations

The aims of this study were to analyze the initial germination aspects and evaluate the effect of sucrose concentrations on in vitro growth of Cattleya violacea. Mature seeds from closed pods were sowed on MS (Murashige and Skoog) culture medium. The external morphology of seed and plantlets were documented by light and scanning electron microscopy. Plantlets with 90 days after sowing were subcultured on ½ MS (with half-strength macronutrients concentrations) culture medium with different sucrose concentrations (0, 10, 20, 30 and 40 g L-1), incubated under the same in vitro conditions during more 150 days followed by the evaluation of root number, root length, shoot length, fresh and dry weight. The biometric data were statistically analyzed and regression curves constructed. The seeds showed reticulate seed coat with a micropylar (opened) and chalazal (closed) end; the embryo results a chlorophyllated tuberiforme structure called protocorm, which may have rhizoids, leaflets and is considered plantlet when it has root. Absence of sucrose or the highest evaluated sucrose concentration was detrimental for plant growth. The concentration of 27 g L-1 provided the highest in vitro growth enabling great efficiency for mass propagation of this species of high ornamental potential.

O presente estudo teve por objetivo analisar os aspectos da germinação e avaliar o efeito de concentrações de sacarose no crescimento in vitro de Cattleya violacea. Sementes provenientes de cápsulas fechadas foram semeadas em meio de cultura Murashige e Skoog (MS) e a morfologia externa da semente à plântula foi fotodocumentada em estereomicroscópio e microscópio eletrônico de varredura. Plântulas com 90 dias após a semeadura foram repicadas em meio de cultura ½ MS (com metade da concentração de macronutrientes) com diferentes concentrações de sacarose (0, 10, 20, 30 e 40 g L-1), incubadas nas mesmas condições in vitro por mais 150 dias e em seguida as plântulas foram avaliadas quanto ao número de raízes, comprimento da maior raiz, número de folhas, comprimento da parte aérea, massa fresca e seca total. Os dados biométricos foram submetidos à análise estatística e a eles ajustadas curvas de regressão. As sementes apresentaram testa reticulada com uma extremidade micropilar (aberta) e calazal (fechada); o embrião originou uma estrutura tuberiforme clorofilada denominada protocormo que pode apresentar rizóides, folíolos e quando provido de raiz é considerado plântula. A ausência de açúcar ou a maior concentração avaliada de sacarose foram prejudiciais ao crescimento da planta. A concentração de 27 g L-1 proporcionou maior crescimento in vitro possibilitando maior eficiência para a propagação massal dessa espécie de elevado potencial ornamental.

Crescimento in vitro e aclimatização de Cattleya loddigesii Lindley (Orchidaceae) com carvão ativado sob dois espectros luminosos / In vitro growth and acclimatization of Cattleya loddigesii Lindley (Orchidaceae) with actived charcoal in two light spectra

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de concentrações de carvão ativado em meio de cultura ½ MS (com metade da concentração dos macronutrientes) sob dois espectros luminosos para a obtenção de plântulas in vitro de Cattleya loddigesii. Plântulas com aproximadamente 90 dias foram subcultivadas em oito tratamentos, nos quais foi testada a adição ao meio de cultura ½ MS com carvão ativado (0; 0,5; 1,0 e 2,0g L-1) e combinados sob espectro de luz branca e luz vermelha. Após 180 dias da germinação, foram mensurados dados biométricos (raiz e parte aérea), massa fresca e teores de pigmentos fotossintéticos. Em plântulas aclimatizadas em casa de vegetação, foram avaliadas a taxa de sobrevivência após 120 dias. As concentrações de clorofila total, clorofila a e carotenoides foram maiores nos tratamentos sob luz branca, enquanto a luz vermelha influenciou significativamente maior clorofila b, plântulas com menos raízes e de menor comprimento e elevada mortalidade ex vitro. A adição de 2,0g L-1 de carvão ativado ao meio de cultura e o uso de luz branca proporcionaram maior eficiência de desenvolvimento tanto para as culturas in vitro quanto para a sobrevivência ex vitro das plantas.

The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of activated charcoal in ½ MS (half concentration of macronutrients) culture medium under two light spectra on the in vitro growth of Cattleya loddigesii seedlings. Plantlets with approximately 90 days were subcultured under eight treatments, consisting of different active charcoal concentrations (0; 0.5; 1.0 and 2.0g L-1) in ½ MS medium combined with white and red light spectra. After 180 days of germination, biometric data, fresh weight, and the level of photosynthetic pigments were evaluated. Plantlets acclimatized in a greenhouse were evaluated for survival after 120 days. Total chlorophyll, chlorophyll a, and carotenoid concentrations were higher in treatments under white light, while red light promoted greater chlorophyll b, plantlets with fewer and shorter roots, and high ex vitro mortality. The addition of 2.0g L-1 of active charcoal to the culture medium and the use of white light provided greater development efficiency both on in vitro culture and ex vitro plant survival.

Variações anatômicas de Laelia purpurata var. cárnea cultivada in vitro sob diferentes intensidades e qualidade spectral de luz / Anatomical variations of Laelia purpurata var. cárnea in vitro cultured under different intensities and spectral quality of light

Plantas de Laelia purpurata var. cárnea propagadas in vitro e mantidas em sala de crescimento e em casa de vegetação foram submetidas a diferentes intensidades e qualidade espectral de luz, envolvidas com diferentes malhas coloridas: azul, vermelha e preta. Foi observado que a intensidade e qualidade espectral de luz interferiram de forma significativa em todos os parâmetros analisados, aos 120 dias de cultivo. Plantas cultivadas sob malha azul em sala de crescimento e casa de vegetação apresentaram maior espessamento da epiderme na face adaxial (31,73 e 35,46µm), respectivamente, diferindo estatisticamente quando comparado com os demais tratamentos. Foi observado aumento significativo no número de camadas de células do velame em raízes de plantas cultivadas em casa de vegetação, independente da malha de sombreamento, quando comparadas com as de sala de crescimento. Em secções transversais de raízes de plantas cultivadas em casa de vegetação sob malha azul, foi observada maior diferenciação dos tecidos (velame, exoderme, córtex e cilindro vascular).

in vitro propagated orchid (Laelia purpurata var. cárnea) were maintained in a growth chamber in a greenhouse and subjected to different spectral intensities and quality of light, using different colored shade-net (blue, red and black). It was observed that the light intensity and spectral quality influenced significantly all the parameters analyzed at 120 days of cultivation. Plants cultivated under blue color shade net at growth chamber and greenhouse presented higher thickening of epidermis on the adaxial face (31.73 and 35.46µm), respectively, and were statistically different when compared with other treatments. It was observed a significant increase in the number of velamen cell layers in plant roots grown in the greenhouse, regardless of the color shade-net used when compared with plants cultivated at growth chamber. It was observed a higher differentiation of tissues (canopy, exodermis, cortex and vascular cylinder) in cross sections plant roots grown in greenhouse under blue shade-net.

Biologia reprodutiva de Cattleya eldorado, uma espécie de Orchidaceae das campinas amazônicas / Reproductive biology of Cattleya eldorado, a species of Orchidaceae from the Amazonian white sand campinas

As Orchidaceae são muito apreciadas por suas flores exóticas e exuberantes. É a maior família de plantas apresentando mais de 24000 espécies, o que denota uma alta diversidade de formas e adaptações a diferentes ambientes, como também para atração, engano e manipulação de visitantes na realização da polinização cruzada. Cattleya eldorado ocorre em áreas de campinas, que são formações vegetais típicas da região amazônica, que se encontram sob forte ação antrópica. Este trabalho tem como um de seus principais objetivos conhecer parte dos processos biológicos de C. eldorado fornecendo subsídios para conservá-la e manejá-la em seu habitat natural. Este estudo foi desenvolvido na Reserva Biológica de Campina, de 2000 a 2006, durante a sua floração. C. eldorado é uma espécie epifítica que apresenta a síndrome de melitofilia, estando adaptada ao seu polinizador, a abelha Eulaema mocsaryi, que reconhece suas flores pelo odor e pelo estímulo visual através de sua coloração e reflexão de luz ultravioleta. C. eldorado é uma espécie autocompatível, embora necessite de um agente polinizador para a transferência do polinário até sua deposição na cavidade estigmática da flor.

The orchid plants are highly prized for their lush exotic flowers. It is the largest plant family with more than 24000 species, which indicates a high diversity of forms and adaptations to different environments, including the capacity to attract, deceive and manipulate visitors involved in cross-pollination. Cattleya eldorado occurs in areas of white sand campinas, a typical vegetation type of the Amazon region, which is under strong anthropogenic pressure. This work's main objectives to know the biological processes of C. eldorado providing subsidies to maintain and manage it in its natural habitat. This study was conducted from 2000 to 2006 in the Campina Biological Reserve, during its flowering period. C. eldorado is an epiphytic orchid species that has the melittophyly syndrome and is adapted to its pollinator, the bee Eulaema mocsaryi recognizing their flowers by smell and by visual stimuli, through their color and reflection of ultraviolet light. C. eldorado is self-compatible, even if it requires a pollinating agent for the transfer of the pollinarium until its deposition in the stigmatic cavity of the flower.

Crescimento in vitro de plântulas de Caularthron bicornutum em diferentes concentrações de sacarose / in vitro growth of Caularthron bicornutum plantlets in different sucrose concentrations

Objetivou-se neste trabalho estudar a influência de diferentes concentrações de sacarose no crescimento in vitro de Caularthron bicornutum (Hook.) Raf. O experimento foi conduzido no Departamento de Tecnologia da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista - Unesp/FCAV, em Jaboticabal, São Paulo (SP), no período de janeiro a outubro de 2009. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado. Foram seis tratamentos (cinco concentrações de sacarose: 10; 20; 30; 40 e 50g L-1 e ausência de sacarose no meio de cultura) e cinco repetições, totalizando 30 parcelas e 12 plântulas/parcela. A semeadura foi feita em meio de cultura MS e, após 90 dias, estas foram selecionadas e transferidas para frascos contendo meio de cultura com metade da concentração de macronutrientes (½ MS), com as diferentes concentrações de sacarose. Aos 150 dias após a semeadura, foi realizado o segundo subcultivo, cujos procedimentos foram semelhantes aos do primeiro, sendo as plântulas reinoculadas para renovação do meio. Após 210 dias da semeadura, foi realizada avaliação. Verificou-se que a sacarose não influenciou a porcentagem de enraizamento, porém foi efetiva no número e crescimento de raízes e da parte aérea de plântulas de Caularthron bicornutum, em concentrações que variaram de 13 a 29g L-1 de sacarose.

This research aimed to studied the influence of different sucrose concentrations in the in vitro growth of Caularthron bicornutum (Hook.) Raf.. The experiment was conducted at Department of Technology of Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista - Unesp/FCAV, Jaboticabal, São Paulo state, in the period of January to October of 2009. Were studied 6 treatments (5 sucrose concentrations: 10; 20; 30; 40 and 50g L-1 and sucrose absence in the middle of culture) and 5 replications with 12 seedlings per replication had been used in a completely randomized design. The seeds were placed in culture medium MS, and after 90 and 150 days they were selected and transferred for flasks containing culture medium ½MS, with the different sucrose concentrations. After 210 days evaluation was accomplished. It was verified that the sucrose in the concentrations from 13 to 29g L-1 provided the largest averages for the number of roots, length of roots and length of the aerial part; however it didn't influence in the rooting percentage of the plântlests of Caularthron bicornutum.

Efecto del carbón activado, ácido indolacético (AIA) y bencil amino purina (BAP) en el desarrollo de protocormos de epidendrum elongatum jacq bajo condiciones in vitro / The effect of activated charcoal, indol acetic acid (IAA) and benzylaminopurine (BAP) on epidendrum elongatum jacq protocorm-like body (PLB) development in vitro conditions

El desarrollo vegetativo de los protocormos de Epidendrum elongatum Jacq., una orquídea endémica y en vías de extinción, se logró eficazmente mediante el cultivo in vitro en el medio Murashige y Skoog (1962), donde se evaluó el efecto de la interacción entre los siguientes tres factores: carbón activado (0,0; 0,5; 1,0% (w/v)); ácido indol acético (0,0; 0,5; 1,0 mg.L-1); bencil amino purina (0,0; 0,5; 1,0 mg.L-1). El medio de cultivo empleado fue enriquecido con sacarosa al 3%, y el Myo inositol al 0,1 g.L-1. En este estudio se evaluó que el efecto sobre la tasa de crecimiento de la interacción del carbón activado en concentraciones de 0,5 y 1,0% con 0,5 mg.L-1 de AIA es positivo para el desarrollo de los protocormos de E. elongatum bajo condiciones in vitro, mientras que la interacción del BAP, tanto en concentraciones de 0,5 mg.L-1 y 1,0 mg.L-1, muestra resultados no tan favorables en cuanto al grado de desarrollo de los protocormos estudiados. Este estudio describe un protocolo que permite alcanzar más de 270.000 plántulas en excelente desarrollo vegetativo dentro de 30 semanas, a partir de una cápsula de esta importante orquídea. Este protocolo es un modelo de conservación para especies que se encuentran en vías de extinción, y además permite la propagación a gran escala de Epidendrum elongatum.

The vegetative development of protocorm-like bodies (PLB) from Epidendrum elongatum Jacq. (an endemic and endangered orchid) was effectively achieved through in vitro culture in Murashige and Skoog medium (1962); the effect of the interaction between the following three factors was studied: activated charcoal (0.0, 0.5, 1.0% (w/v)), indol acetic acid (0.0, 0.5, 1.0 mg.L-1), benzylaminopurine (0.0, 0.5, 1.0 mg.L-1). The culture medium being gerused was enriched with 3% sucrose and 0.1 g.L-1 myo-inositol. This study revealed that the effect of 0.5% and 1.0% activated charcoal concentrations interacting with 0.5 mg.L-1 AIA on PBL growth rate was positive for E. elongatum PBL development in vitro conditions, whereas the interaction of BAP (at both 0.5 mg.L-1 and 1.0 mg.L-1 concentration) did not produce such favourable results regarding the degree of development of the PLB being studied. This study describes a protocol leading to more than 270,000 seedlings enjoying excellent vegetative growth being obtained within 30 weeks from a single capsule from this important orchid. This protocol represents a model for conserving endangered species and promotes large-scale Epidendrum elongatum propagation.

Luz natural e concentrações de sacarose no cultivo in vitro de Cattleya walkeriana / Sunlight and sucrose concentrations on in vitro culture of Cattleya walkeriana

Cattleya walkeriana é uma das mais apreciadas orquídeas do mundo, possuindo grande valor ornamental. A micropropagação é uma importante ferramenta para reprodução dessa espécie. Pelos altos custos de produção através da micropropagação convencional, relacionados à perdas durante aclimatização e alto consumo de energia em salas de crescimento, objetivou-se com este trabalho avaliar estratégias alternativas no cultivo in vitro. Foram testados dois diferentes fatores, sendo eles luz (em sala de crescimento convencional, casa de vegetação com sombreamento de 50%, e casa de vegetação sem sombreamento) e concentrações de sacarose (0, 15 e 30 g.L-1). O material se constitui de plântulas previamente germinadas in vitro, em meio MS e cultivadas em sala de crescimento por 90 dias. Luz natural em casa de vegetação, resultou em aumento no número de brotos, na espessura foliar e na freqüência e diâmetro dos estômatos, e ocasionou diminuição do comprimento das plântulas e dos teores de clorofila. Um menor número de raízes e brotações foram formados na concentração de 15 g.L-1 de sacarose. A ausência de sacarose resultou em menores teores de clorofila. Pela análise dos resultados, foi possível concluir que o ambiente de cultivo altera as respostas de plântulas cultivadas in vitro e pode-se recomendar o uso da luz natural e redução nas concentrações de sacarose pela metade para a micropropagação de Cattleya walkeriana, observando-se a fase da propagação e os objetivos da mesma.

Cattleya walkeriana is one of the most important orchids in the world and has high ornamental value. Micropropagation plays an important role in the reproduction of this species. Based on high production costs of the standard micropropagation regarding the losses during acclimatization and high energy consumption in growth chambers, this paper aimed at evaluating alternative strategies for the in vitro cultivation. Two different factors were tested: light (standard growth chamber, greenhouse with 50% shading, and greenhouse without shading) and sucrose concentrations (0, 15, and 30g.L-1). The material was composed by plantlets previously germinated in vitro on MS medium and cultivated in a growth chamber for 90 days. Natural light in greenhouse induced an increase in the number of shoots, leaf thickness, stomata frequency and diameter and, on the other hand, caused decrease in the plantlet length and chlorophyll levels. Lower number of roots and shoots were formed at the concentration of 15g.L-1 sucrose. The absence of sucrose resulted in lower chlorophyll levels. Based on these results, it was possible to conclude that the cultivation environment modifies the response of in vitro cultivated plantlets and the natural light and reduction of sucrose concentrations by half can be recommend for the micropropagation of Cattleya walkeriana, taking in consideration the propagation phases and their goals.

Cultivo de Oncidium baueri Lindley (Orchidaceae) em substratos a base de coco / Oncidium baueri Lindley (Orchidaceae) cultivation in coconut-based substrates

Entre os substratos utilizados no cultivo de orquídeas, a fibra de coco vem se destacando como promissor substituto do xaxim, material utilizado por muitos produtores e colecionadores de orquídeas, porém ameaçado de extinção. Objetivou-se, neste trabalho, foi avaliar a eficiência de substratos à base de coco, no cultivo da orquídea Oncidium baueri. As mudas foram cultivadas em vasos de polipropileno, permanecendo em viveiro com 50 por cento de luminosidade. Os tratamentos constituíram-se de xaxim desfibrado, coco desfibrado, coco em pó, coco desfibrado + coco em pó, coxim (coco em cubos), coxim + coco em pó e coxim + coco desfibrado. Após dezenove meses, foram avaliadas as variáveis: altura das plantas, diâmetro dos pseudobulbos, comprimento da maior raiz, massa seca das raízes, número de brotações e pH dos substratos. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com sete tratamentos e dez repetições. Para todas as variáveis avaliadas, os substratos coco em pó e a mistura de coco desfibrado com coco em pó mostraram-se tão eficientes ao desenvolvimento das plantas quanto o xaxim desfibrado, podendo substituí-lo no cultivo de O. baueri.

Among the several substrates used in orchid growing, coconut fiber is being considered the most promising substitute for xaxim (tree fern fiber), material highly used by orchid growers and collectors, which has become endangered. The objective of this study was to evaluate the efficiency of coconut-based substrates in the cultivation of the Brazilian orchid Oncidium baueri. Seedlings were grown in polypropylene vases kept in a nursery with 50 percent of lighting. Treatments included: defibered tree fern (control), de-fibered coconut, coconut powder, de-fibered coconut + coconut powder, coxim (diced coconut.), coxim + coconut powder and coxim + de-fibered coconut. Plant height, pseudo bulbs diameter, number of buds, root dry matter weight, root length and pH substrate were evaluated 19 months later. The experimental design was entirely casualized, with 7 treatments and 10 replications. For all analyzed variables, the substrates powdered coconut and the mixture of defibered coconut with powdered coconut were as efficient to the plants development as the defibered tree fern and can substitute it in the O.baueri cultivation.

Influência da caseína hidrolisada no cultivo in vitro deOncidium baueri (Orchidaceae) / Influence of hydrolized casein on the Oncidium baueri(Orchidaceae) in vitro cultivation

O nitrogênio possui grande importância para a maioria das espécies cultivadas in vitro. Está envolvidonos processos fisiológicos e bioquímicos associados ao controle de crescimento, diferenciação emorfogênese, sendo a caseína uma das principais fontes de suplementação do nitrogênio. O objetivodeste trabalho foi avaliar a influência de diferentes concentrações de caseína hidrolisada no crescimentovegetativo e enraizamento in vitro de Oncidium baueri (Orchidaceae). Os tratamentos testados foram:T1- 0,0 g.L-1; T2- 0,5 g.L-1 de caseína hidrolisada; T3- 1,0 g.L-1 de caseína hidrolisada; T4- 2,0 g.L-1 decaseína hidrolisada e T5- 4,0 g.L-1 de caseína hidrolisada. O meio de cultura utilizado foi o Murashige eSkoog (1962), modificado com metade da concentração de macronutrientes. Após seis meses do iníciodo experimento foram avaliados: massa fresca total; altura da parte aérea; comprimento da maior raiz; númerode raízes e número de brotações laterais. Não se observou efeito benéfico no desenvolvimento vegetativo eradicular de Oncidium baueri em meio de cultura suplementado com caseína hidrolisada. A porcentagem desobrevivência foi 100%, 95% e 94%, respectivamente para T1, T2 e T3, e 80% para T4 e T5.

The nitrogen is essentially important for most in vitro cultivated species. It is regarded to the physiologicaland biochemical processes involved in growth control, differentiation and morphogenesis, and casein isone of the main nitrogen supplementation sources. The objective of this work was to evaluate theinfluence of different concentrations of hydrolized casein on the invitro vegetative growth and rootingof Oncidium baueri (Orchidaceae). The treatments tested were: T1- 0.0 g.L-1; T2- 0.5 g.L-1; T3- 1.0 g. L-1;T4 ­2.0 g.L-1; T5- 4.0 g.L-1 of hydrolized casein. The culture medium used was the Murashige and Skoogmodified with half macronutrients concentration. Total fresh mass, aerial part height, biggest root length,roots number and lateral sprouts number were evaluated after six months from the beginning of theexperiment. It was not detected any beneficial effects of casein on vegetative and root development ofOncidium baueri. The percentage of surviving plants was 100%, 95 % and 94%, respectively for T1, T2and T3, and 80% of surviving plants for T4 and T5